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因此,我們通過(guò)測(cè)量磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中材料的熱載流子提取情況,評(píng)估了3DFG在激光激發(fā)下可能產(chǎn)生的光電流。
測(cè)量使用了連接到3DFG微電極的膜片鉗放大器(圖S3)。激發(fā)時(shí),我們使用了波長(zhǎng)為1064納米的聚焦皮秒脈沖激光,因?yàn)檫@是通過(guò)光聲產(chǎn)生的納米沖擊波進(jìn)行細(xì)胞穿孔的最佳配置。在激發(fā)過(guò)程中,激光聚焦在3DFG表面,光斑直徑為2微米,對(duì)于所測(cè)激光平均入射功率(分別為1.3至7.6毫瓦),功率密度在414至2419瓦/平方毫米之間。圖1D展示了在不同激光強(qiáng)度下3DFG與PBS接觸面產(chǎn)生的光電流。6毫秒激光脈沖序列產(chǎn)生的電流行為表明存在電容電流和法拉第電流的組合,這與之前對(duì)硅基納米材料的觀察結(jié)果一致。
具體而言,我們觀察到在激光開(kāi)啟時(shí)有一個(gè)明顯的初始電流峰值,隨后在激光脈沖序列期間出現(xiàn)一個(gè)準(zhǔn)穩(wěn)態(tài)電流平臺(tái)。在激光脈沖序列結(jié)束后,觀察到一個(gè)幅度較低的負(fù)電流峰值。圖1E展示了不同激光強(qiáng)度下的電容電流和法拉第電流。我們認(rèn)為法拉第電流可能與3DFG中熱載流子的發(fā)射有關(guān),即那些處于熱平衡之外的高能電子被材料排出并注入電解質(zhì)。在基于石墨烯的3D納米結(jié)構(gòu)中產(chǎn)生熱電子的現(xiàn)象此前已被證實(shí)。這些產(chǎn)生的熱載流子已被提出是通過(guò)類似于俄歇機(jī)制從石墨烯中被彈出。在先前的一項(xiàng)研究中,納米線模板化三維石墨烯(NT-3DFG)在低功率激光照射下表現(xiàn)出高光熱響應(yīng),這歸因于光容性而非法拉第機(jī)制。
盡管這些結(jié)果表明在三維石墨烯中光熱現(xiàn)象占主導(dǎo)地位,但我們已確定了可能造成當(dāng)前研究中觀察到的法拉第響應(yīng)的關(guān)鍵區(qū)別因素。用于光電流測(cè)量的皮秒激光脈沖的峰值功率在1.5至11瓦之間。這一激光功率值范圍比之前關(guān)于NT-3DFG的研究中所報(bào)告的要高出幾個(gè)數(shù)量級(jí)。此外,本研究中所用激光的光斑尺寸小于之前的研究(分別為2微米和20微米)。因此,在相同的入射激光功率下,當(dāng)前測(cè)量中的平均功率密度大約高出100倍。這表明三維石墨烯中的激光激發(fā)熱載流子發(fā)射可能遵循閾值機(jī)制,因而僅在高峰值功率密度下才會(huì)發(fā)生,這與在其他材料中先前觀察到的情況一致。然而,通過(guò)超快脈沖激光刺激在三維場(chǎng)效應(yīng)晶體管(3DFG)中產(chǎn)生熱電子的確切機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。
02.3DFG微電極陣列-心肌細(xì)胞界面
由于高生物相容性對(duì)于實(shí)現(xiàn)與細(xì)胞的長(zhǎng)期穩(wěn)定界面至關(guān)重要,我們首先通過(guò)評(píng)估人胚胎干細(xì)胞來(lái)源的心肌細(xì)胞(hESC-CMs)的細(xì)胞活力來(lái)研究3DFG可能的毒性效應(yīng)。活力和壓力試驗(yàn)證實(shí)3DFG不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞毒性。
隨后,為了研究3DFG電極上細(xì)胞的生長(zhǎng)和健康狀況,將人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源的心肌細(xì)胞(hiPSC-CMs)培養(yǎng)在3DFG微電極陣列上,并進(jìn)行了免疫組織化學(xué)熒光標(biāo)記。在hiPSC-CMs上,結(jié)果表明心肌肌鈣蛋白T(綠色)有大量表達(dá),這突出了心肌結(jié)構(gòu),正如成熟hiPSC心肌細(xì)胞所預(yù)期的那樣(圖2A)。圖像還顯示NKX2-5(紅色)的表達(dá)量極低,NKX2-5是心臟祖細(xì)胞的標(biāo)志物,僅有15.38±3.47%的細(xì)胞表達(dá)NKX2-5。這證實(shí)了心臟細(xì)胞培養(yǎng)總體上已正確成熟。
圖2.3DFG MEA-心肌細(xì)胞界面。(A)在3DFG-MEAs上培養(yǎng)7天的hiPSC-CMs的明場(chǎng)(I和III)和免疫熒光圖像(II和IV)。比例尺,100微米(I和II)和50微米(III和IV)。(B)hiPSC-CMs在3DFG MEAs上的偽彩色掃描電子顯微鏡圖像。比例尺,5微米。(C)HL-1細(xì)胞在3DFG上的橫截面掃描電子顯微鏡圖像。右側(cè)圖像顯示細(xì)胞核為綠色,細(xì)胞質(zhì)為藍(lán)色,3DFG為紅色。比例尺,2微米。
我們還通過(guò)橫截面聚焦離子束掃描電子顯微鏡成像評(píng)估了3DFG與心肌細(xì)胞之間的界面。HL-1細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源的心肌細(xì)胞(hiPSC-CMs)在3DFG上培養(yǎng)24小時(shí)后進(jìn)行固定和脫水。在3DFG電極上培養(yǎng)的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源的心肌細(xì)胞(hiPSC-CMs)的頂視圖/傾斜視圖掃描電子顯微鏡圖像和HL-1細(xì)胞的橫截面掃描電子顯微鏡圖像證實(shí)了細(xì)胞膜與3DFG之間緊密的黏附。